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荧光定量PCR仪操作与维护简述
点击次数:3 发布时间:2020-01-15
     简单的说,荧光定量PCR仪就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。
 
    目前,常用的技术,可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准,可以将PCR仪分为普通PCR仪,梯度PCR仪,原位PCR仪,实时荧光定量PCR仪四类。
 
    荧光定量PCR仪实验操作注意事项:
 
    尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因,样品间的交叉污染也是原因之一。因此,不仅要在进行扩增反应是谨慎认真,在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意:
 
    1、戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套;
 
    2、使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要长时间暴露于空气中,避免气溶胶的污染;
 
    3、避免反应液飞溅,打开反应管时为避免此种情况,开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上,应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面;
 
    4、操作多份样品时,制备反应混合液,先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好,然后分装,这样即可以减少操作,避免污染,又可以增加反应的精确度;
 
    5、加入反应模板,加入后盖紧反应管;
 
    6、荧光定量PCR仪操作时设立阴阳性对照和空白对照,即可验证PCR反应的可靠性,又可以协助判断扩增系统的可信性;
 
    7、尽可能用可替换或可高压处理的加样器,由于加样器容易受产物气溶胶或标本DNA的污染,使用可替换或高压处理的加样器。
 
    如没有这种特殊的加样器,至少PCR操作过程中加样器应该专用,不能交叉使用,尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区;
 
    8、荧光定量PCR仪重复实验,验证结果,慎下结论。

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